納米抗體是一種從駝類動物以及鯊魚等動物體內提取的一種天然缺失輕鏈的抗體，因為其結構很小，達到納米級，因此被稱為納米抗體。納米抗體的可溶性極高，而且不易聚集、耐高溫、耐強酸強堿等，適用于各種原核、真核蛋白的表達。下面，普健生物和大家具體聊聊有關納米抗體制備的具體過程。

　　1、目的基因提取

　　從動物體內(駝類動物或鯊魚)提取所需的RNA和cDNA，通過相關的生物技術手段，將其提取出來并進行克隆表達;

　　2、納米抗體基因構建

　　通過選擇適當的引物，對VHH基因進行擴增。而后將擴增后的VHH基因克隆到表達載體(一般包含啟動子、標記基因以及VHH基因等)中;

　　3、選擇合適的蛋白表達系統(tǒng)

　　一般來說，原核表達與真核表達的選擇是各不相同的。對于原核表達系統(tǒng)來說，可以選擇大腸桿菌表達系統(tǒng)來表達，而對于真核表達系統(tǒng)過來說，可以選擇哺乳動物表達系統(tǒng)來進行表達;

　　4、蛋白表達及優(yōu)化

　　通過細胞轉染或細菌感染的方式，將目的基因轉染到表達載體中，通過對相關培養(yǎng)條件進行優(yōu)化(比如溫度、培養(yǎng)基成分、轉染時間等)，從而提升納米抗體的表達概率;

　　5、細胞培養(yǎng)

　　通過調控相應的培養(yǎng)條件，對轉染后的細胞進行培養(yǎng)，使得目的基因隨著蛋白的表達而表達，而后通過相關細胞破碎技術，將蛋白釋放出來，而后通過離心等方式獲得細胞上清液;

　　6、蛋白純化

　　通過親和層析法(通過特異性靶標結合的特性，使用親和層析柱來提升其純度)、透析法(在進行親和層析后，進行透析，去除其中的雜質)、離心法(利用超速離心的方式去除細胞碎片和大顆粒物)等方式，提升蛋白的純度;

　　7、蛋白評估

　　對蛋白進行純度、功能等各方面特性的評估，而后將其進行凍存，以實現其長期保持的穩(wěn)定性;

　　以上就是納米抗體制備的一般表達過程，當然了，對于不同的公司來說，因為技術、儀器、技術團隊等方面的區(qū)別，其制備過程有著一定不同，但是，總體來說是大體相同的。而納米抗體制備的具體流程，需要結合目的蛋白的不同方式來進行選擇，這樣才能更好地獲得所需蛋白。更多納米抗體制備的相關知識，敬請關注普健生物。