重組蛋白表達是現階段我們生產蛋白產品最常用的方法之一，它在極大程度上解決了天然蛋白抗體解決不了的問題。但是，在日常我們表達蛋白的過程中，即便是按照實驗順序嚴格執(zhí)行，依然會遇到很多的問題，最終導致蛋白表達失敗的情況。在這里，普健生物具體和大家聊聊蛋白表達的一些常見問題，及其對應的解決辦法。

　　1、設計方面的問題

　　如果表達出來的蛋白出現密碼子移位、稀有子密碼問題、信號肽問題、蛋白大小問題、標簽蛋白選擇問題以及GC含量太高等問題時，就是因為序列設計方面的問題。這個時候我們就需要回憶反思一下，看看具體的問題出來哪里，然后有針對性地進行解決;

　　2、操作過程方面的問題

　　操作過程方面的問題主要出現在質粒構建和表達工程菌使用等方面的失誤所造成。在質粒構建完成后，必須測序確認，保證無突變更不能出現堿基多余或是缺失，并確認外源片段插入后讀框碼與載體步調完全一致才行。

　　而針對工程菌的使用，必須確認標準有效，與載體質粒配套，否則，容易造成表達質粒丟失的情況;

　　3、蛋白容易降解的問題

　　很多蛋白在完成表達等一系列的過程后，我們卻無法分離或提純出來，主要是因為剛表達出來就被細菌內的蛋白酶降解掉了，這個時候我們就需要看看過程，尋找一下相應的解決辦法;

　　4、培養(yǎng)基的問題

　　一些蛋白在LB培養(yǎng)基中表達不成功，但是換成TB或2*YT培養(yǎng)基后就能表達成功。所以，當無法表達成功時，我們可以考慮更換培養(yǎng)基來繼續(xù)表達;

　　5、分子量異常的問題

　　有一些蛋白的分子量和我們的預想有著一定的偏差，這個時候我們可以分析一下蛋白，看其本身氨基酸組合是否符合均態(tài)分布的規(guī)律。實驗過程中，我們需要仔細對比誘導/非誘導菌體蛋白帶譜差異，再結合數據進行判斷;

　　當然了，蛋白表達中可能會遇到各種各樣的問題，并不是我們如上所說的幾種，我們也可以結合實驗數據，對比相關文獻進行處理。當然了，實在解決不了的時候，可以考慮通過專業(yè)的蛋白表達公司來處理。普健生物專業(yè)為您提供蛋白抗體表達服務，如果您有相關需求，歡迎來電咨詢。