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噬菌體展示技術的關鍵步驟流程

發(fā)表時間:2023-03-28 訪問次數(shù):448

歷經40年的發(fā)展,噬菌體展示技術日趨成熟,已然成為抗體發(fā)現(xiàn)技術的主流平臺之一。隨著抗體工程的高速發(fā)展,抗體從鼠源到全人源的產業(yè)已成趨勢,科研人員對于抗體功能的改造、雙/多特異性抗體的研發(fā)需求更甚,對抗體篩選和優(yōu)化的技術要求也進一步提高,噬菌體展示技術也在這個過程中也發(fā)揮越來越重要作用。

噬菌體展示抗體庫是目前發(fā)展最成熟、應用最為廣泛的基因工程抗體篩選技術,通過噬菌體展示技術使基因工程抗體以融合蛋白的形式展示在噬菌體外殼蛋白 gpⅢ或 gpⅧN 端,從而將抗體的基因型和表型連接起來,用固相或液相化抗原與抗體庫孵育,經「吸附洗脫擴增」數(shù)個循環(huán)使特異性克隆得以富集,因而具有簡便、快速和高效的優(yōu)點。

噬菌體展示技術的優(yōu)勢

1. 方法簡便快速、耗時少。從 mRNA 提取到抗體庫構建,繼而篩選出特異性抗體的陽性克隆僅需幾周的時間。
2. 篩選容量大、效率高。噬菌體抗體庫中通常含有 106-109 個不同抗原結合特異性的抗體分子克隆,可以對百萬乃至億萬個分子進行選擇,且每一輪「吸附-洗脫-擴增」可以使抗原特異性較強的克隆得到富集,非常容易從抗體庫中篩選到特異性抗體。
3. 易于在基因水平操作,蛋白質表型與基因型統(tǒng)一??梢愿鶕?jù)不同目的「隨心所欲」地改造抗體結構、進行基因突變,制備各種新型抗體;另外,還可以將噬菌體抗體與一些功能性分子偶聯(lián)形成免疫毒素、酶標抗體等,進一步拓寬了抗體的應用范圍。
4. 易于規(guī)模化生產。

噬菌體展示技術流程

一般來說,噬菌體展示技術有以下5個步驟:
步驟1:構建噬菌體展示庫
重組DNA技術用于將外來cDNA整合到病毒DNA中。不同的基因組被插入到多個噬菌體的基因組中。剪接到一個外殼蛋白的基因中,使該蛋白顯示在噬菌體顆粒的外面,而這些分離的噬菌體只展示一種蛋白、肽或抗體。這些噬菌體的集合即為庫,如抗體噬菌體庫、蛋白質噬菌體庫或隨機噬菌體庫。
步驟2:結合
這些庫暴露于選定的目標,只有一些噬菌體會與目標相互作用。這些目標是計劃識別特定的配體,如固定的蛋白、細胞表面蛋白或組織細胞表面蛋白。
步驟3:洗滌
未結合的噬菌體可以被洗滌緩沖液沖走,只留下那些對受體有親和力的噬菌體。
步驟4:洗脫
洗脫緩沖液洗脫回收對目標有親和力的噬菌體
步驟5:放大
展示特異性的洗脫噬菌體被用來感染新的宿主細胞進行擴增,或直接進行細菌感染和擴增回收的噬菌體。

噬菌體展示技術由于其廣泛的應用領域備受關注,這就要求廣大從業(yè)者在熟悉,掌握噬菌體展示技術的同時,廣泛的開展交流與學習,不斷地在應用噬菌體展示這一技術的同時取得新的突破。